Ćw. 03b Izolowanie komórek z narządów limfatycznych, Biol UMCS, V semestr, Immunologia
[ Pobierz całość w formacie PDF ]
//-->Ćw. 3 – Izolowanie komórek z narządów limfatycznych.Izolowanie limfocytów ze śledziony.alkohol skażonyjałowe wacikipłyn fizjologiczny10% MEMprobówki na materiał biologicznyszalki Petrie’gojałowe narzędzia (nożyczki, pęsety, strzykawki,igły preparacyjne)stół preparacyjny na myszyIzolacja makrofagów z otrzewnejWacikiem z alkoholem przetrzed skórę myszy.Przeciąd i odciągnąd skórę, uwidaczniając otrzewną.Pod kątem ok. 45° wprowadzid strzykawkę z 10% MEMdo otrzewnej.Wypuścid 10% MEM do wnętrza otrzewnej.„Wymasowad” wypełniony 10% MEM brzuch(uwolnienie większej ilości komórek).Ostrożnie pobrad zawartośd otrzewnej strzykawką(wysięk).Zawartośd strzykawki przelad do probówki (wysięk).*Izolacja limfocytów z grasicy i śledzionyGRASICAWacikiem z alkoholem przetrzed skórę myszy.Przeciąd skórę, następnie otrzewną i mostek,uwidaczniając grasicę)Wyciąd grasicę jałowymi narzędziami (nożyczki ipęsetka).Umieścid grasicę na szalce Petrie’goz 10% MEM.(dalej postępować jak ze śledzioną)ŚLEDZIONAUłożyd mysz na prawym boku.Odkazid skórę etanolem.Naciąd skórę jałowymi nożyczkami.Odciągnąd skórę palcami.Odciągnąd skórę palcami.Przeciąd otrzewnę i uwidocznid śledzionę.Wyciąd śledzionę jałowymi narzędziami (nożyczki ipęsetka).Umieścid śledzionę na szalce Petrie’goz 10% MEM.„Wyczesad” śledzionę/grasicę jałową igłą preparacyjnąlub nożyczkami.Zebrad płyn (z limfocytami) do probówki.Następnie odstawid zawiesinę na 15 min. w celuoddzielenia się większych fragmentów tkanki.Następnie zebrad klarowny płyn do probówek.*
[ Pobierz całość w formacie PDF ]