Ćwiczenie 5-2015poprawione, Biologia UMCS, IIº, II semestr, Mikrobiologia lekarska, Ćwiczenia, Skrypty
[ Pobierz całość w formacie PDF ]
//-->Ćwiczenie 5Metody identyfikacji pałeczek rodzajuPseudomonasSzczepy:1.Pseudomonas aeruginosaATTC 278532.Pseudomonas aeruginosaZMO3.Pseudomonas aeruginosaspojówka4.Pseudomonas aeruginosaATCC 101455.Pseudomonas fluorescens6.Pseudomonas putida7.Acinetobacter baumaniiATCC 19606Podłoża i testy:1. Podłoże TSA2. Podłoże z dodatkiem 0,09% cetrymidu3. Podłoże Mac Conkeya4. Podłoże Kinga A5. Podłoże Kinga B6. Skosy agaru odżywczego7. Podłoże płynne LB8. Test na oksydazęWykonanie ćwiczenia:1. Wykonać preparaty i wybarwić je metodą Grama2. Na podłoża 1-3 wysiać bakterie metodą sektorowo-redukcyjną.Podłoże z cetarymidem(bromek cetylotriaminiowy) umożliwia selektywnąizolację szczepówP. aeruginosa.W tym celu można też użyć kwasunalidyksowego (5-15g/ml) lub podłoża TTC zawierającego 1% chlorkutrifenylotetrazolinowego.133. Wysiać szczepy na skosy Kinga A i B4. Zdolność do wzrostu badanych szczepów w 42C (w tych warunkach rosnąszczepyP. aeruginosa i Acinetobacter)sprawdzić wysiewając bakterie naskosy podłoża LB i inkubując w w/w temperaturze.5. Na kolejnych ćwiczeniach wykonać testy na oksydazę i katalazę na podłożuTSA.6. Do hodowli płynnej dodać 1 ml chloroformu, intensywnie wymieszać –obserwowaćdyfuzjębarwnikawytwarzanegoprzezP.aeruginosa(piocjaniny) do fazy chloroformowejPodłoże KING ASkład podłoża (g/l):Pepton K 20,00Glukoza 10,00Wodorofosforan dipotasu 10,00Siarczan magnezu 1,40Agar 15,00Końcowe pH 7.2 ± 0.1 w 25ºC (po sterylizacji)Opis:Podłoże King A służy do izolacji, różnicowania i oznaczania liczby bakteriiPseudomonas,na podstawie tworzeniapiocyjaninyi/lubpiorubiny.Podłoże to zawiera składniki odżywcze gwarantujących wzrost i rozmnażaniesię bakterii z rodzajuPseudomonas.Obecność w podłożu siarczanu magnezusprzyja wytwarzaniu charakterystycznej pigmentacji przez bakterie z rodzajuPseudomonas.Na podłożu Kinga A bakterieP. aeruginosawytwarzają niebieski barwnikpiocyjaninę, który może spowodować, że kolonie zabarwią się na kolorniebieskozielony.14Podłoże KING BSkład podłoża (g/l):Pepton K 20,00Wodorofosforan dipotasu 1,50Siarczan magnezu x 7H2O 1,50Agar 15,00Końcowe pH 7.2 ± 0.2 w 25ºC (po sterylizacji)Dodać 10 ml gliceroluOpis:Podłoże King B służy do wykrywania, różnicowania i oznaczania liczby bakteriifluoryzujących(napodstawie tworzenia fluoresceiny).PałeczkiP. fluorescens, P. aeruginosarosną w postaci przezroczystych kolonii,które w świetle dziennym barwią się na niebiesko-zielonkawy kolor lub mogąpozostać bezbarwne, dodatkowo mają równe lub nieco nieregularne brzegi.P.fluorescensw temperaturze powyżej 35ºC rośnie w postaci drobnych kolonii.Bakterie z rodzajuPseudomonaszdolne do wytwarzania barwnika -fluoresceiny, wykazują fluorescencje w świetle UV przy dł. fali fali 366 nm.Agar z cetrymidemSkład podłoża (g/l):Pepton G 20,00Chlorek magnezu 1,40Siarczan potasu 10,00Cetrymid 0,30Agar 13,60Końcowe pH 7.2 ± 0.2 w 25ºC (po sterylizacji)Dodać 10 ml glicerolu15Opis:Agarowe podłoże N z cetrymidem stosowane do izolacji i różnicowaniaPseudomonas aeruginosaw surowcach przeznaczonych do produkcji leków, jaki w lekach gotowych oraz innych materiałach.Podłoże ma charakter wybiórczy dzięki obecnościcetrymidu,który hamujewzrost większości mikroflory towarzyszącej. Obecność w podłożu chlorkumagnezu i siarczanu potasu sprzyja wytwarzaniu charakterystycznej pigmentacjiprzez bakterie z rodzajuPseudomonas.Podłoże MAC CONKEYASkład podłoża (g/l):Pepton K 17,00Pepton 3,00Laktoza 10,00Sole Żółci 1,50Chlorek sodu 5,00Czerwień obojętna 0,03Fiolet krystaliczny 0,001Agar 14,00Końcowe pH 7.2 ± 0.2 w 25ºC (po sterylizacji)Opis:Podłoże MacConkey’a służy do wstępnej kontroli obecnościShigella,Salmonellai bakterii z grupy coli w produktach spożywczych, ściekach, kale imoczu.Podłoże MacConkey’a jest podłożemwybiórczymw stosunku do większościbakterii gram-dodatnich, dzięki obecnościsoli żółci i fioletu krystalicznego.Podłoże pełni również funkcjeróżnicując,pozwalając na stwierdzeniezdolnościwykorzystania laktozyprzez mikroorganizmy.16Bakterie z rodzinyEnterobacteriaceaemające zdolność wykorzystywanialaktozy z wytworzeniem kwasów, powodują spadek pH środowiska hodowli, costwierdza się dzięki obecności indykatora pH - czerwieni obojętnej. Laktozo-ujemne mikroorganizmy rosną w postaci bezbarwnych lub jasnożółtych koloniioraz obserwuje się zmianę zabarwienia podłoża z czerwonej na żółtą, a laktozo-dodanie rosną w postaci czerwonych kolonii, nie obserwuje się zmiany kolorupodłoża.Salmonella, Shigella- rośnie w postacibezbarwnych,przejrzystych kolonii.Klebsiella, Enterobacter- rośnie w postaci dużych,różowychkolonii.Escherichia coli- rośnie w postaci dużych,czerwonychkolonii.Gronkowce – wzrost zahamowany lub rosną w postaci małych, mętnychróżowych kolonii.17
[ Pobierz całość w formacie PDF ]